總蛋白測定試劑盒（雙縮脲法）檢測項目解析

總蛋白測定是臨床生化檢驗中的基礎(chǔ)項目之一，主要用于評估機體蛋白質(zhì)代謝狀態(tài)及疾病診斷。雙縮脲法作為經(jīng)典的總蛋白檢測方法，因其操作簡便、成本低廉、重復性好等優(yōu)勢，被廣泛應用于醫(yī)療機構(gòu)和實驗室。該試劑盒通過雙縮脲與蛋白質(zhì)肽鍵的特異性反應，在堿性環(huán)境中與銅離子形成紫色絡(luò)合物，其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度呈正相關(guān)，最終通過分光光度法實現(xiàn)定量分析。適用于血清、血漿、腦脊液等樣本中總蛋白含量的檢測，在肝臟疾病、腎臟疾病、營養(yǎng)狀態(tài)評估及多發(fā)性骨髓瘤等疾病的診療中具有重要價值。

一、檢測原理與反應體系

雙縮脲法基于蛋白質(zhì)分子中肽鍵（-CONH-）與堿性溶液中的銅離子特異性結(jié)合的原理。在試劑體系中，氫氧化鈉提供堿性環(huán)境，酒石酸鉀鈉維持反應穩(wěn)定性，硫酸銅作為銅離子來源。當?shù)鞍诐舛仍?0-120g/L范圍內(nèi)時，生成的紫色絡(luò)合物在540-560nm波長處呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢測靈敏度可達0.5g/L。

二、核心檢測項目組成

1. 標準品系列：包含已知濃度的蛋白質(zhì)標準溶液，用于建立標準曲線；
2. 顯色試劑：由氫氧化鈉、硫酸銅和酒石酸鉀鈉按特定比例配制；
3. 質(zhì)控品：高、中、低三個濃度的質(zhì)控血清；
4. 樣本處理液：用于特殊樣本（如脂血、溶血樣本）的前處理；
5. 反應終止液（部分試劑盒配備）。

三、關(guān)鍵檢測步驟與質(zhì)量控制

檢測流程包括樣本預處理、標準曲線制備、顯色反應和吸光度測定四部分。操作時需注意：
- 樣本需離心去除顆粒物，溶血樣本需特殊標注
- 反應溫度嚴格控制在25±1℃，顯色時間精確至10分鐘
- 每次檢測需同步測定質(zhì)控品，允許變異系數(shù)應＜5%
- 標準曲線R2值需≥0.995方為有效

四、臨床意義與干擾因素

檢測結(jié)果異常可見于：
- 升高（＞85g/L）：脫水、多發(fā)性骨髓瘤、慢性炎癥
- 降低（＜60g/L）：肝硬化、腎病綜合征、嚴重營養(yǎng)不良
需注意膽紅素＞342μmol/L、甘油三酯＞10mmol/L、血紅蛋白＞5g/L可能引起正干擾，需進行樣本稀釋后復測。

五、方法學比較與改進方向

相較于凱氏定氮法和BCA法，雙縮脲法具有檢測速度快（15分鐘完成）、抗干擾能力強的特點，但對低濃度蛋白（＜5g/L）敏感性不足。新型改良試劑盒通過添加表面活性劑增強顯色穩(wěn)定性，檢測線性范圍可擴展至150g/L，精密度提升至CV＜2%。