華蟾素注射液檢測(cè)項(xiàng)目與技術(shù)規(guī)范

一、引言

二、核心檢測(cè)項(xiàng)目

1. • 性狀與鑒別
     • 外觀：應(yīng)為淡黃色至橙黃色澄明液體，無(wú)可見異物。
     • 薄層色譜（TLC）或高效液相色譜（HPLC）法鑒別特征成分（如華蟾酥毒基、酯蟾毒配基等）。
   • pH值
     • 范圍：5.0~7.0，避免對(duì)血管刺激。
   • 滲透壓摩爾濃度
     • 應(yīng)符合注射劑要求（280~320 mOsmol/kg）。
2. • 總蟾毒內(nèi)酯含量
     • 采用HPLC-UV聯(lián)用技術(shù)，定量檢測(cè)蟾毒配基類成分（如華蟾酥毒基、脂蟾毒配基），含量通常控制在0.1~0.5 mg/mL。
   • 吲哚類生物堿
     • 利用液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）檢測(cè)5-羥色胺類似物，防止神經(jīng)毒性。
3. • 異常毒性試驗(yàn)
     • 小鼠腹腔注射后觀察72小時(shí)，確保無(wú)急性毒性反應(yīng)。
   • 熱原檢查
     • 家兔法或鱟試劑法（細(xì)菌內(nèi)毒素限值≤2.15 EU/mL）。
   • 過(guò)敏反應(yīng)
     • 豚鼠主動(dòng)全身過(guò)敏試驗(yàn)（ASA），檢測(cè)異種蛋白殘留。
   • 溶血與凝聚
     • 體外紅細(xì)胞懸浮試驗(yàn)，排除溶血風(fēng)險(xiǎn)。
4. • 無(wú)菌檢查
     • 直接接種法或薄膜過(guò)濾法，符合《中國(guó)藥典》無(wú)菌要求。
   • 細(xì)菌內(nèi)毒素
     • 動(dòng)態(tài)濁度法鱟試驗(yàn)，定量檢測(cè)內(nèi)毒素水平。
5. • 重金屬殘留
     • 原子吸收光譜法測(cè)定鉛、砷、汞、鎘（總量≤10 ppm）。
   • 有機(jī)溶劑殘留
     • 氣相色譜（GC）檢測(cè)乙醇、丙酮等工藝溶劑的殘留量。
   • 大分子雜質(zhì)
     • 分子排阻色譜（SEC）檢測(cè)蛋白質(zhì)、多糖類雜質(zhì)。
6. • 體外抗腫瘤活性
     • CCK-8法測(cè)定對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞或肺癌A549細(xì)胞的抑制率。
   • 免疫調(diào)節(jié)功能
     • ELISA檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2、IFN-γ分泌水平。

三、質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù)

• 指紋圖譜技術(shù) 建立HPLC或UPLC特征指紋圖譜，監(jiān)控批次間一致性，相似度≥90%。
• DNA條形碼鑒定 對(duì)原料蟾蜍進(jìn)行COI基因測(cè)序，防止物種混淆（如黑眶蟾蜍混入）。
• 穩(wěn)定性考察 長(zhǎng)期（24個(gè)月）和加速（6個(gè)月）試驗(yàn)，評(píng)估成分降解及性狀變化。

四、問(wèn)題與挑戰(zhàn)

1. 成分復(fù)雜性 蟾蜍毒素含50余種活性成分，需建立多指標(biāo)質(zhì)控體系。
2. 過(guò)敏原控制 動(dòng)物源性異源蛋白難以完全去除，需優(yōu)化純化工藝。
3. 新型檢測(cè)技術(shù) 推廣LC-QTOF/MS高分辨質(zhì)譜技術(shù)，實(shí)現(xiàn)痕量毒性成分篩查（如蟾力蘇）。

五、

1. 《中國(guó)藥典》2020年版第四部
2. 《中藥注射劑安全性再評(píng)價(jià)技術(shù)要求》
3. 張等. 華蟾素注射液質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J]. 中草藥, 2021.