豬繁殖與呼吸綜合征診斷檢測概述

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是由PRRS病毒引起的一種高度接觸性傳染性疾病，對養豬業造成重大經濟損失。該病以妊娠母豬流產、死胎、木乃伊胎及仔豬呼吸道癥狀為主要特征，臨床診斷需結合流行病學、病理學與實驗室檢測。隨著分子生物學技術的進步，檢測方法不斷優化，精準性和效率顯著提升，助力早期發現和疫情控制。

檢測項目

PRRS診斷檢測主要包括以下項目：

• 病原檢測：直接檢測病毒核酸或抗原，適用于急性感染期樣本。
• 抗體檢測：通過血清學方法檢測感染后產生的抗體，用于群體免疫狀態評估。
• 鑒別診斷：排除豬瘟、偽狂犬病等臨床癥狀相似的疫病。

檢測儀器

常用檢測儀器包括：

• 實時熒光定量PCR儀：用于病毒RNA的快速定量檢測，靈敏度高。
• 酶標儀（ELISA檢測系統）：適用于血清抗體的大規模篩查。
• 核酸提取儀：自動化提取樣本中的病毒核酸，減少人為誤差。
• 凝膠成像系統：用于RT-PCR產物的電泳分析。

檢測方法

PRRS診斷技術主要分為三類：

• 分子生物學檢測
  • RT-PCR/實時熒光RT-PCR：針對ORF5、ORF7等基因片段進行擴增，特異性強，檢測限可達102拷貝/μL。
  • 巢式PCR：提高低濃度樣本的檢出率，但需注意交叉污染風險。
• 血清學檢測
  • ELISA（間接法/阻斷法）：檢測IgG抗體，適用于群體監測，如IDEXX PRRS X3抗體檢測試劑盒。
  • 免疫熒光試驗（IFA）：用于抗體效價測定，操作復雜但結果直觀。
• 病毒分離培養：使用Marc-145細胞系分離病毒，耗時長但可獲取活毒株。

檢測標準

PRRS檢測需遵循以下標準：

• 國際標準：世界動物衛生組織（OIE）《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》中規定的操作流程。
• 國家標準：中國《GB/T 22915-2008 豬繁殖與呼吸綜合征診斷技術》規范了RT-PCR和ELISA方法。
• 行業規范：實驗室需通過生物安全二級（BSL-2）認證，檢測試劑應獲得農業農村部批文。

質量控制與注意事項

檢測過程中需重點關注：

• 樣本采集：選擇發病急性期的肺臟、淋巴結或血清，低溫運輸避免RNA降解。
• 交叉驗證：ELISA陽性樣本建議用PCR復檢，降低假陽性率。
• 基因分型：針對北美型（Type 2）和歐洲型（Type 1）設計特異性引物。