雞傳染性鼻炎瓊脂免疫擴(kuò)散試驗檢測概述

雞傳染性鼻炎（Infectious Coryza, IC）是由副雞禽桿菌（Avibacterium paragallinarum）引起的一種急性呼吸道傳染病，對養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。瓊脂免疫擴(kuò)散試驗（Agar Gel Immunodiffusion, AGID）是檢測該病抗原或抗體的經(jīng)典方法之一，具有操作簡便、成本低廉、特異性較高等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于實驗室診斷和流行病學(xué)調(diào)查。該技術(shù)通過抗原與抗體在瓊脂凝膠中的擴(kuò)散形成沉淀線，直觀反映樣本中目標(biāo)成分的存在，特別適用于基層實驗室的初步篩查和疫苗免疫效果評估。

檢測項目

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗主要用于檢測以下兩類項目： 1. 抗原檢測：針對副雞禽桿菌的K抗原或型特異性抗原，用于病原體分型或急性感染期樣本的直接檢測。 2. 抗體檢測：通過已知抗原檢測血清中的特異性抗體，評估雞群免疫狀態(tài)或感染后的抗體動態(tài)變化。

檢測儀器與試劑

試驗所需核心儀器包括： - 瓊脂糖凝膠板制備系統(tǒng)（含加熱磁力攪拌器、水平臺） - 打孔器及模板（孔徑3-4mm，孔距3-5mm） - 溫控培養(yǎng)箱（37℃±1℃，濕度60%-70%） - 紫外透射儀或暗視野觀察箱 關(guān)鍵試劑包括：標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原/抗體、瓊脂糖（純度≥1.5%）、巴比妥緩沖液（pH 8.6）及染色劑（如考馬斯亮藍(lán)）。

檢測方法與步驟

試驗流程分為以下步驟： 1. 瓊脂板制備：將1%瓊脂糖與緩沖液混合，加熱溶解后倒入平皿形成3mm厚凝膠層。 2. 打孔與加樣：采用梅花形孔陣，中央孔加入標(biāo)準(zhǔn)抗原，周圍孔分別加待檢血清和陰陽性對照。 3. 擴(kuò)散反應(yīng)：濕盒內(nèi)37℃孵育24-48小時，抗原抗體在凝膠中擴(kuò)散形成沉淀線。 4. 結(jié)果判讀：肉眼觀察沉淀線融合情況，陽性樣本與標(biāo)準(zhǔn)抗原/抗體間出現(xiàn)清晰連續(xù)的沉淀帶。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量控制

試驗需嚴(yán)格遵循以下標(biāo)準(zhǔn)： - 國家標(biāo)準(zhǔn)：NY/T 551-2020《雞傳染性鼻炎診斷技術(shù)》中AGID操作規(guī)范。 - 國際參考：OIE《陸生動物診斷試驗手冊》規(guī)定的抗原效價（≥1:16）和血清稀釋度（通常1:4-1:8）。 質(zhì)量控制要點(diǎn)包括：每批次試驗必須設(shè)置陽性/陰性對照；抗原抗體需進(jìn)行效價標(biāo)定；環(huán)境溫度波動需≤±1℃；沉淀線判讀需由兩名實驗員獨(dú)立驗證。

注意事項與局限性

1. 抗原抗體比例需嚴(yán)格優(yōu)化，避免前帶或后帶現(xiàn)象影響靈敏度。 2. 部分B型菌株可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)，需結(jié)合PCR或血清學(xué)分型確認(rèn)。 3. 感染早期（＜7天）或免疫后2周內(nèi)可能出現(xiàn)假陰性，建議動態(tài)采樣檢測。 4. 試驗靈敏度低于ELISA，陰性結(jié)果需結(jié)合臨床綜合判斷。

總結(jié)

瓊脂免疫擴(kuò)散試驗作為雞傳染性鼻炎的傳統(tǒng)檢測手段，在基層實驗室仍具有重要應(yīng)用價值。通過規(guī)范化的操作流程和嚴(yán)格的質(zhì)量控制，可實現(xiàn)快速、經(jīng)濟(jì)的初步診斷，為臨床防控提供關(guān)鍵依據(jù)。但需注意其局限性，必要時聯(lián)合分子生物學(xué)方法提高檢測準(zhǔn)確性。