傳染性鮭魚貧血病病毒（ISAV）介紹

傳染性鮭魚貧血病（Infectious Salmon Anaemia, ISA）是一種由傳染性鮭魚貧血病病毒（ISAV）引起的嚴重魚類疾病，主要影響大西洋鮭魚（Salmo salar）。ISAV屬于正粘病毒科（Orthomyxoviridae），與流感病毒類似，首次于1984年在挪威被報道，現已成為水產養殖業的重要威脅。該病毒通過水體、感染魚或污染物傳播，導致魚群出現貧血、鰓蒼白、肝脾腫大等高致死癥狀，死亡率可高達90%。ISAV對經濟影響巨大，僅在挪威就曾造成數十億美元的損失，因此早期檢測對疫情控制、國際貿易合規（如OIE規定）和養殖業可持續性至關重要。檢測不僅能預防大規模爆發，還可監測病毒變異，支持疫苗開發和生物安全管理。范圍內，ISAV被列為法定報告疾病，強制檢測是防控策略的核心。

檢測項目

ISAV檢測項目旨在全面評估病毒感染狀態，包括直接病原檢測和間接免疫反應分析。關鍵項目包括：1) 病毒核酸檢測：聚焦于ISAV RNA的定性與定量檢測，用于確認活動性感染；2) 病毒抗原檢測：通過免疫學方法識別組織或血清中的病毒蛋白；3) 抗體血清學檢測：檢測魚體內IgM或IgG抗體水平，揭示既往或慢性感染；4) 組織病理學檢查：觀察肝、腎等器官的病變特征（如壞死或炎癥）；5) 病毒分離與培養：作為金標準，在細胞系中培養病毒以確認活性。這些項目綜合應用可提高靈敏度與特異性，特別在疫情監測和種魚檢疫中發揮核心作用。

檢測儀器

進行ISAV檢測依賴齊全的實驗室儀器，確保準確性和高效性。主要儀器包括：1) 實時熒光定量PCR儀：如ABI QuantStudio系列，用于高靈敏度RNA擴增與定量；2) ELISA分光光度計：如BioTek酶標儀，測量抗原或抗體的光密度值；3) 核酸提取設備：如Qiagen自動提取儀，快速純化樣本RNA；4) 離心機：用于樣品預處理和細胞分離；5) 組織培養系統：包括CO2培養箱和倒置顯微鏡，支持病毒分離；6) 凝膠成像系統：分析PCR產物電泳結果。這些儀器需定期校準，確保符合ISO 17025標準，以維護檢測可靠性。

檢測方法

ISAV檢測方法多樣，根據目的和資源選擇適用技術：1) 分子生物學方法：如反轉錄實時熒光定量PCR（RT-qPCR），使用ISAV特異性引物（如針對HA或F基因）擴增RNA，靈敏度達1-10拷貝/μl；2) 免疫學方法：包括酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測抗體，以及免疫組化（IHC）在組織切片中定位抗原；3) 病毒分離法：將樣品接種于敏感細胞系（如SHK-1），觀察細胞病變效應（CPE）；4) 快速診斷試劑盒：如側流層析試紙條，適用于現場篩查；5) 高通量測序：用于病毒基因組分析和變異監測。RT-qPCR為最常用方法，因其快速（4-6小時出結果）、高特異性和可定量化優勢。

檢測標準

ISAV檢測嚴格遵循國際和國家標準，確保結果可比性與可信度。核心標準包括：1) OIE標準：世界動物衛生組織《陸生動物診斷測試手冊》詳細規定采樣、方法驗證和陽性判讀（如qPCR Ct值≤40）；2) ISO/IEC指南：如ISO 17025對實驗室質量控制的要求；3) 國家規范：如挪威獸醫研究所（NVI）或美國農業部（USDA）發布的檢測協議，強調樣品保存（-80°C運輸）、重復測試和陽性對照；4) 性能標準：要求靈敏度≥95%、特異性≥98%，使用OIE認證引物探針組。合規檢測需通過能力驗證，支持疾病報告和出口認證，減少假陽/陰性風險。