一、實(shí)時(shí)熒光PCR的核心檢測(cè)項(xiàng)目

1. 病原體核酸檢測(cè)

• 病毒檢測(cè)：
  • 新冠病毒（SARS-CoV-2）：通過(guò)檢測(cè)病毒ORF1ab、N基因等靶標(biāo)，用于確診病例及無(wú)癥狀感染者。
  • 流感病毒：區(qū)分甲型（H1N1、H3N2）、乙型流感病毒及亞型。
  • 肝炎病毒：H（乙肝病毒）、HCV（丙肝病毒）、HAV（甲肝病毒）的定量檢測(cè)，評(píng)估病毒載量。
  • HIV病毒：監(jiān)測(cè)病毒RNA水平，指導(dǎo)抗病毒治療。
• 細(xì)菌檢測(cè)：
  • 結(jié)核分枝桿菌（MTB）：快速診斷結(jié)核病，區(qū)分耐藥菌株（如利福平耐藥基因rpoB突變）。
  • 肺炎支原體/衣原體：用于呼吸道感染的鑒別診斷。
• 其他病原體：
  • 真菌（如白色念珠菌）、**寄生蟲(chóng)（如瘧原蟲(chóng)）**的核酸檢測(cè)。

2. 基因表達(dá)分析

• 腫瘤標(biāo)志物：如乳腺癌相關(guān)基因BRCA1/2、肺癌EGFR突變檢測(cè)。
• 炎癥因子：如IL-6、TNF-α的定量分析，評(píng)估炎癥反應(yīng)程度。
• 藥物代謝相關(guān)基因：如CYP450家族基因多態(tài)性檢測(cè)，指導(dǎo)個(gè)體化用藥。

3. 基因分型與遺傳變異檢測(cè)

• 單核苷酸多態(tài)性（SNP）分析：檢測(cè)與疾病易感性或藥物反應(yīng)相關(guān)的基因突變。
• 染色體異常：如唐氏綜合征（21三體）的產(chǎn)前篩查。
• 腫瘤基因突變：EGFR、KRAS、BRAF等基因突變的檢測(cè)，用于靶向治療指導(dǎo)。

4. 轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)

5. 法醫(yī)學(xué)與親子鑒定

二、實(shí)時(shí)熒光PCR的檢測(cè)流程

1. 樣本處理：采集血液、咽拭子、組織等樣本，提取核酸。
2. 引物/探針設(shè)計(jì)：針對(duì)靶標(biāo)基因設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（如TaqMan探針、SYBR Green染料）。
3. 擴(kuò)增與熒光監(jiān)測(cè)：在PCR儀中擴(kuò)增靶序列，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度。
4. 數(shù)據(jù)分析：通過(guò)閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）判斷靶標(biāo)是否存在，并計(jì)算拷貝數(shù)。

三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 高靈敏度：可檢測(cè)低至幾個(gè)拷貝的核酸。
2. 高特異性：探針與靶序列的特異性結(jié)合減少假陽(yáng)性。
3. 快速性：2小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。
4. 定量能力：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量。

四、典型應(yīng)用案例

1. 新冠核酸檢測(cè)：疫情防控的核心手段。
2. HPV分型檢測(cè)：區(qū)分高危型（HPV16/18）與低危型HPV，指導(dǎo)宮頸癌篩查。
3. 遺傳病診斷：地中海貧血、囊性纖維化等單基因病的基因突變檢測(cè)。

五、注意事項(xiàng)

1. 樣本質(zhì)量：避免RNA降解（如檢測(cè)RNA病毒時(shí)需使用RNase抑制劑）。
2. 引物設(shè)計(jì)：需避開(kāi)同源序列，防止非特異性擴(kuò)增。
3. 污染控制：嚴(yán)格分區(qū)操作（試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)）。
4. 質(zhì)量控制：設(shè)置內(nèi)參基因（如β-actin）排除假陰性。

六、未來(lái)發(fā)展方向