對蝦白斑病毒分子生物學檢測檢測
實驗室擁有眾多大型儀器及各類分析檢測設備,研究所長期與各大企業(yè)、高校和科研院所保持合作伙伴關系,始終以科學研究為首任,以客戶為中心,不斷提高自身綜合檢測能力和水平,致力于成為全國科學材料研發(fā)領域服務平臺。
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對蝦白斑病毒(White Spot Syndrome Virus, WSSV)是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中危害最嚴重的病毒之一,可導致對蝦在短時間內(nèi)大量死亡,造成巨大的經(jīng)濟損失。該病毒具有高傳染性和高致死率,一旦暴發(fā)可摧毀整個養(yǎng)殖場。傳統(tǒng)的病理學觀察和免疫學檢測方法存在靈敏度低、耗時長等局限性,而分子生物學檢測技術憑借其高特異性、靈敏度和快速性,成為當前WSSV檢測的核心手段。通過精準的核酸分析技術,能夠早期發(fā)現(xiàn)病毒感染,為防控措施提供關鍵依據(jù),有效避免疫情擴散。
檢測項目
對蝦白斑病毒分子生物學檢測的主要目標是檢測WSSV的DNA特異性序列。常見的檢測項目包括:1)WSSV基因組中保守區(qū)域(如VP28、VP26等結構蛋白基因)的擴增;2)病毒載量定量分析;3)病毒基因型分型(針對不同變異株的鑒別)。檢測樣本通常為對蝦的鰓組織、肝胰腺或血淋巴,也可針對養(yǎng)殖水體中的病毒顆粒進行環(huán)境監(jiān)測。
檢測儀器
檢測過程需依賴多種精密儀器:1)PCR儀(用于DNA擴增);2)實時熒光定量PCR儀(用于病毒定量檢測);3)核酸電泳儀(驗證擴增產(chǎn)物);4)核酸提取儀(自動化提取樣本DNA);5)凝膠成像系統(tǒng)(分析電泳結果)。其中實時熒光定量PCR儀是核心設備,可同時實現(xiàn)擴增和檢測,靈敏度可達102 copies/μL。
檢測方法
目前主流的檢測方法包括:
1. 常規(guī)PCR法:通過設計WSSV特異性引物擴增靶基因,結合瓊脂糖凝膠電泳判斷結果。該方法成本低但靈敏度相對較低。
2. 實時熒光定量PCR(qPCR):采用TaqMan探針或SYBR Green染料法,實時監(jiān)測擴增過程,可精確定量病毒拷貝數(shù),檢測限達100 copies/g組織。
3. 環(huán)介導等溫擴增(LAMP):在恒溫條件下快速擴增靶序列,適用于現(xiàn)場快速檢測,30分鐘內(nèi)即可完成。
4. 數(shù)字PCR(dPCR):通過微滴分割實現(xiàn)絕對定量,尤其適合極低濃度樣本的檢測。
檢測標準
國內(nèi)外主要參考的檢測標準包括:
1)世界動物衛(wèi)生組織(OIE)《水生動物疾病診斷手冊》中規(guī)定的PCR檢測流程;
2)中國農(nóng)業(yè)部行業(yè)標準《NY/T 2973-2016 對蝦白斑綜合征病毒檢測技術規(guī)范》;
3)出入境檢驗檢疫標準《SN/T 1675-2019 對蝦白斑病毒實時熒光PCR檢測方法》;
4)ISO/TS 15216-2:2019中關于水產(chǎn)病原分子檢測的質(zhì)量控制要求。
結語
分子生物學檢測技術為對蝦白斑病毒的精準防控提供了重要支撐。在實際應用中,需嚴格遵循標準化操作流程,定期驗證檢測體系的靈敏度和特異性,同時結合流行病學調(diào)查進行綜合判斷。隨著CRISPR檢測等新技術的應用,未來檢測效率將進一步提升,為保障對蝦養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展發(fā)揮更大作用。

