雞傳染性法氏囊病酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測概述

雞傳染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病，主要侵害雛雞和青年雞的免疫器官——法氏囊，導致免疫抑制，增加繼發(fā)感染風險，對養(yǎng)禽業(yè)造成嚴重經濟損失。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）作為一種高靈敏度、高特異性的免疫學檢測方法，被廣泛用于IBD的抗原和抗體檢測，為疾病診斷、免疫效果評估及流行病學調查提供重要依據。通過ELISA檢測，可快速篩查感染雞群，監(jiān)測疫苗免疫后的抗體水平，從而優(yōu)化防控策略。

檢測項目

IBD的ELISA檢測主要分為兩類：一是病毒抗原檢測，用于直接檢測病雞組織或分泌物中的IBDV抗原；二是抗體檢測，用于評估雞群免疫后的血清抗體水平或自然感染后的抗體反應。抗原檢測適用于早期感染的快速診斷，而抗體檢測則用于免疫程序評估和群體免疫狀態(tài)分析。

檢測儀器與試劑

ELISA檢測需配備以下核心儀器與試劑： 1. **酶標儀**：用于讀取反應孔的光密度（OD值），需具備450nm波長濾光片； 2. **洗板機**：確保反應孔洗滌徹底，減少背景干擾； 3. **微量移液器**（單道、多道）：精確加樣，保證檢測重復性； 4. **預包被ELISA試劑盒**：通常包含IBDV抗原包被板、酶標二抗、顯色底物（如TMB）、終止液等； 5. 其他輔助設備：如恒溫培養(yǎng)箱（37℃）、振蕩器等。

檢測方法步驟

ELISA檢測流程包括以下關鍵步驟： 1. **包被與封閉**：將IBDV抗原固定于微孔板，隨后用封閉液（如牛血清白蛋白）封閉非特異性結合位點； 2. **加樣與孵育**：加入待檢血清或組織樣本，陽性對照和陰性對照，37℃孵育使抗原-抗體結合； 3. **洗滌**：用PBST緩沖液清洗未結合物質； 4. **酶標二抗結合**：加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗雞IgG抗體，再次孵育； 5. **顯色與終止**：加入顯色底物TMB，避光反應后加終止液終止反應； 6. **OD值測定**：通過酶標儀讀取450nm處的吸光度值，計算樣本與陰性對照的比值（S/N）判定結果。

檢測標準與結果判定

檢測需遵循相關標準： - **國家標準**：如《GB/T 19167-2003 傳染性法氏囊病診斷技術》中推薦的ELISA方法； - **國際標準**：參考世界動物衛(wèi)生組織（OIE）《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》的檢測流程。 結果判定通常以臨界值（Cut-off值）為依據，若樣本OD值≥臨界值（通常為陰性對照均值+3倍標準差），則判定為陽性，表明存在IBDV抗原或特異性抗體。

注意事項

1. 樣本處理需規(guī)范，血清應避免溶血或反復凍融； 2. 試劑盒需嚴格按照說明書保存（如2-8℃避光）； 3. 實驗過程中需設置復孔，確保結果可靠性； 4. 操作環(huán)境需符合生物安全要求，避免交叉污染。